要折騰嬌貴的細胞寶寶,，必須要在無菌超凈環(huán)境下才行。超凈工作臺,，所有的儀器用品提前滅菌,，培養(yǎng)箱什么的定期用酒精擦干凈。微生物污染對細胞的影響經(jīng)常是開始的時候沒發(fā)現(xiàn),，發(fā)現(xiàn)的時候已經(jīng)結(jié)束了,，所以千萬要小心。除了操作中的各種小細節(jié),，還有一個實驗雷區(qū),，就是配制細胞凍存液。常見的凍存液配制要遵循培養(yǎng)基+血清+DMSO的成分要求,，根據(jù)細胞實際判斷成分配比,，還建議使用程控儀，注意配制溫度,，一個不小心就又會影響細胞的存活效果,。學霸君給各位養(yǎng)細胞的科研汪們帶來一款細胞神器——WakoBAMBANKER®即用型無血清細胞凍存液?？梢栽诒纬芍?，優(yōu)先結(jié)合細胞外的水分子。廈門貴陽無血清細胞凍存液

細胞凍存的基本原理：細胞代謝過程需要各種蛋白酶的參與,，而這些蛋白酶在環(huán)境溫度低于-70℃時會集體不工作,，低溫貯藏的目的是通過較低溫使細胞代謝活動近乎停止。細胞因此進入休眠狀態(tài),，使細胞“不會老”,，所以可以長期保存。因為凍融過程對所有細胞和組織都是有一定傷害的,，因此,，需要開發(fā)出有效的技術(shù)來防止細胞死亡和損傷。低溫保護劑可保護細胞不受細胞內(nèi)冰凍影響,，目前多采用DMSO,，甘油,，乙二醇和丙二醇等滲透型低溫保護劑,。它們的作用機制包括：自由進入細胞，取代水,，使冰點下降,，充當鹽的二次溶劑，提高細胞膜對水的通透性,。鄭州正規(guī)無血清細胞凍存液進貨價無血清細胞凍存液，用于各種動物細胞株（tumour細胞和常規(guī)細胞）,，凍存細胞可在-80℃長期保存。

無血清細胞凍存液的用途：無血清細胞凍存液,，含多種保護劑成分,。一些保護劑,，易于穿透細胞,，避免細胞內(nèi)部水分子形成冰晶損傷細胞，同時另一些保護劑不能穿透細胞,，但可以在冰晶形成之前,，優(yōu)先結(jié)合細胞外的水分子，降低細胞外溶液的電解質(zhì)濃度,，減少陽離子進入細胞的數(shù)量,，為多種保護劑組合，在細胞內(nèi)外進行雙重保護,，較大提高了細胞復(fù)蘇存活率,。無血清細胞凍存液不含牛血清，無動物源組份,。2-8℃即可穩(wěn)定保存,，無需冷凍，即取即用,。凍存細胞,，無需程序降溫。凍存細胞復(fù)蘇率在90%以上,。

產(chǎn)品特性：a.可直接放置于-80℃冰箱，無需降溫,，節(jié)省時間和精力,；b.即用型，無需現(xiàn)配,，操作方便,，可減少實驗中因操作引起的污染；c.在多種哺乳細胞系中經(jīng)過性能驗證,，其復(fù)蘇率和活率達90%以上,；d.可長期存儲于-80℃冰箱(5年以上),，取用方便；e.采用成分明確的無血清配方,，價格比常規(guī)自配細胞凍存液更為低廉,；保存溫度：2~8℃具體操作步驟：1、培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶中細胞按常規(guī)方法消化,，或分離獲得原代細胞后,，收集于離心管中。2,、使用離心機離心,，去除上清，收集細胞沉淀,。3,、根據(jù)細胞生長密度加入適量的細胞凍存液進行重懸，充分混勻(推薦凍存密度為1-2×106/ml),。4,、將細胞懸液分裝至凍存管中，直接放置于-80℃冰箱保存,。24小時后可移入液氮長期保存(可選),。快速凍存簡化了凍存步驟,，同時不需要使用梯度凍存盒,。

無血清細胞凍存液：凍存注意：開蓋之前，用70%的乙醇或異丙醇擦拭瓶身,。以下說明適用于在6孔板內(nèi)的培養(yǎng)物的凍存,。培養(yǎng)物應(yīng)該在適合傳代的時候進行收集和凍存。每管所含有的細胞應(yīng)當來源于6孔板的1個培養(yǎng)孔,。如果使用其他的培養(yǎng)器皿,，請相應(yīng)的調(diào)整體積。1.在室溫（15-25°C）以300xg離心5分鐘,。2.輕輕吸走上清液,，注意不要擾動細胞團。3.用血清學吸管以1mL的TBD-698重懸細胞,。在打散細胞團時,，盡量減少細胞聚集體分解。4.用2mL的血清學吸管將1mL的細胞聚集體轉(zhuǎn)移到標記好的凍存管中,。5.用以下方法凍存細胞聚集體:推薦使用緩速降溫方法,，每分鐘降低1度，隨后可以在-196°C液氮長期保存,。不推薦在-80°C長期保存,。逐步降溫法：-20°C保存2個小時,，然后-80°C中保存2個小時，隨后可以在-196°C液氮中長期保存,。無血清凍存液用途：本產(chǎn)品請于保質(zhì)期內(nèi)使用,，超過保質(zhì)期，必須放棄使用,。唐山正規(guī)無血清細胞凍存液推薦廠家

無血清凍存液使用方法：將加有凍存液的細胞懸液分裝至凍存管中,。廈門貴陽無血清細胞凍存液

細胞凍存，我們應(yīng)該注意哪些事項：1,、有文獻表明,，細胞以l℃/min的速度冷凍存活率較髙，因為這一速度可以很好的控制細胞內(nèi)部晶體的產(chǎn)生,。我們實際操作不可能將速度控制的這么精確,，目前慣用的就是4℃30min、-20℃1h30min,、-80℃2h后轉(zhuǎn)入液氮中,。2、正常情況下,，經(jīng)過-20℃1h30min這一步后,，凍存管內(nèi)的細胞已經(jīng)處于凝固狀態(tài)，如果此時凍存管內(nèi)還是液體,，很可能是DMSO或冰箱冷凍功能出現(xiàn)了問題,。如若遇到這種情況，不能因為時間到了,，就把把液體狀態(tài)的凍存管放置到液氮中,，可以適當延長在-20℃環(huán)境下的冷凍時間30-60分鐘，直至凍存液凝固后再放到液氮中,。廈門貴陽無血清細胞凍存液