免疫熒光技術(shù)的主要特點(diǎn)是：特異性強(qiáng),、敏感性高、速度快,。主要缺點(diǎn)是：非特異性染色問題尚未完全解決,，結(jié)果判定的客觀性不足，技術(shù)程序也還比較復(fù)雜,。熒光免疫法按反應(yīng)體系及定量方法不同,，還可進(jìn)一步分做若干種。與放射免疫法相比,，熒光免疫法無放射性污染,，并且大多操作簡(jiǎn)便，便于推廣,。國(guó)外生產(chǎn)的TDM用試劑盒,，有相當(dāng)一部分即屬于此類，并且還有TDM熒光偏振免疫分析用的自動(dòng)分析儀生產(chǎn),。由于一般熒光測(cè)定中的本底較高等問題,，熒光免疫技術(shù)用于定量測(cè)定有一定困難。新發(fā)展了幾種特殊的熒光免疫測(cè)定,，與酶免疫測(cè)定和放射免疫分析一樣,，在臨床檢驗(yàn)中應(yīng)用。免疫熒光技術(shù)可以用于研究細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)的定位和表達(dá)水平,。VWF免疫熒光試驗(yàn)
免疫熒光檢測(cè)相對(duì)于酶檢測(cè)的優(yōu)勢(shì)：定量熒光信號(hào)的能力（與使用基于酶的方法進(jìn)行的定性測(cè)定相反）,；復(fù)用能力（可以結(jié)合不同發(fā)射光譜的熒光染料來檢測(cè)多種蛋白質(zhì)）；熒光染料的光穩(wěn)定性,。免疫熒光技術(shù)是根據(jù)抗原抗體反應(yīng)的原理,，先將已知的抗原或抗體標(biāo)記上熒光素，制成熒光抗體,，再用這種熒光抗體（或抗原）作為探針檢測(cè)組織或細(xì)胞內(nèi)的相應(yīng)抗原（或抗體）,。在組織或細(xì)胞內(nèi)形成的抗原抗體復(fù)合物上含有標(biāo)記的熒光素，利用熒光顯微鏡觀察標(biāo)本,，熒光素受外來激發(fā)光的照射而發(fā)生明亮的熒光（黃綠色或橘紅色）,，可以看見熒光所在的組織細(xì)胞，從而確定抗原或抗體的性質(zhì),、定位,，以及利用定量技術(shù)測(cè)定含量。VWF免疫熒光試驗(yàn)免疫熒光技術(shù)可以通過熒光信號(hào)顯示和檢查細(xì)胞或組織內(nèi)的抗原或半抗原物質(zhì),。
免疫熒光通過抗體與示蹤物質(zhì)結(jié)合,，利用抗原-抗體結(jié)合反應(yīng)，進(jìn)而對(duì)抗原所在的細(xì)胞或組織進(jìn)行定性或定量。由于熒光素所發(fā)的熒光可在熒光顯微鏡下檢出,，熒光素受激發(fā)光的照射而發(fā)出明亮的熒光,，可以看見熒光所在的細(xì)胞或組織，利用定量技術(shù)測(cè)定含量,，從而可對(duì)抗原進(jìn)行細(xì)胞定性和定位分析,。細(xì)胞免疫熒光用途：快速直觀顯示所檢測(cè)蛋白的細(xì)胞定位。材料與儀器：樣品：貼壁細(xì)胞,；試劑：4% 組織固定液,，PBS，Triton X-100,，BSA,，熒光二抗，免疫熒光染色二抗稀釋液,，抗熒光猝滅封片液,，0.25% 胰酶；器材：6/12/24 孔板,，細(xì)胞爬片（蓋玻片）,，載玻片，15 ml 離心管,。
免疫熒光法是將免疫學(xué)方法(抗原抗體特異結(jié)合)與熒光標(biāo)記技術(shù)結(jié)合起來研究特異蛋白抗原在細(xì)胞內(nèi)分布的方法,。由于熒光素所發(fā)的熒光可在熒光顯微鏡下檢出，從而可對(duì)抗原進(jìn)行細(xì)胞定位,。用免疫熒光技術(shù)顯示和檢查細(xì)胞或組織內(nèi)抗原或半抗原物質(zhì)等方法稱為免疫熒光細(xì)胞(或組織)化學(xué)技術(shù),。免疫熒光細(xì)胞化學(xué)是根據(jù)抗原抗體反應(yīng)的原理,，先將已知的抗原或抗體標(biāo)記上熒光素制成熒光標(biāo)記物,，再用這種熒光抗體(或抗原)作為分子探針檢查細(xì)胞或組織內(nèi)的相應(yīng)抗原(或抗體)。在細(xì)胞或組織中形成的抗原抗體復(fù)合物上含有熒光素,，利用熒光顯微鏡觀察標(biāo)本,，熒光素受激發(fā)光的照射而發(fā)出明亮的熒光(黃綠色或桔紅色)，可以看見熒光所在的細(xì)胞或組織,，從而確定抗原或抗體的性質(zhì),、定位。免疫熒光技術(shù)是將抗體與熒光素等示蹤物質(zhì)結(jié)合,，通過抗原抗體反應(yīng)進(jìn)行定位,。
細(xì)胞和組織樣品處理：準(zhǔn)備熒光標(biāo)記的細(xì)胞樣品：為實(shí)現(xiàn)較佳的圖像質(zhì)量，首先應(yīng)建立針對(duì)目的蛋白和細(xì)胞結(jié)構(gòu)的研究,，同時(shí)將其他一切背景等排除在圖像之外,。固定和破膜細(xì)胞樣品用于標(biāo)記–首先將細(xì)胞結(jié)構(gòu)、蛋白和核酸固定，然后使熒光染料和抗體滲入到細(xì)胞內(nèi)部,，標(biāo)記目的靶點(diǎn),。封閉細(xì)胞樣品，防止熒光標(biāo)記物與研究無關(guān)的蛋白非特異性結(jié)合,，較大限度提高信噪比,。蛋白封閉液有助于減少非特異染色?？贵w能夠取代封閉蛋白與其表位形成高親和力結(jié)合,，而封閉液可防止樣品中的低親和力結(jié)合。免疫熒光技術(shù)可以同時(shí)檢測(cè)多個(gè)目標(biāo)分子,，通過不同顏色的熒光染料進(jìn)行標(biāo)記,。VWF免疫熒光試驗(yàn)
免疫熒光技術(shù)可以用于研究遺傳疾病和基因表達(dá)調(diào)控。VWF免疫熒光試驗(yàn)
免疫熒光應(yīng)用范圍：其應(yīng)用范圍極其普遍,，可以測(cè)定內(nèi)分泌,、蛋白質(zhì)、多肽,、核酸,、神經(jīng)遞質(zhì)、受體,、細(xì)胞因子,、細(xì)胞表面抗原、肉瘤標(biāo)志物,、血藥濃度等各種生物活性物質(zhì),。根據(jù)診斷類別，又可分為傳染性疾病,、內(nèi)分泌,、藥物檢測(cè)、免疫學(xué),、血型鑒定等,。許多物質(zhì)都可產(chǎn)生熒光現(xiàn)象，但并非都可用作熒光色素,。只有那些能產(chǎn)生明顯的熒光并能作為染料使用的有機(jī)化合物才能稱為免疫熒光色素或熒光染料,。異硫氰酸熒光素為黃色或橙黃色結(jié)晶粉末，易溶于水或酒精等溶劑,。分子量為389.4,，較大吸收光波長(zhǎng)為490495nm，較大發(fā)射光波長(zhǎng)520530nm,，呈現(xiàn)明亮的黃綠色熒光,。VWF免疫熒光試驗(yàn)