使用方法：1,、細(xì)胞培養(yǎng)器皿的表面包被：以包被濃度為2μg/cm2為例,，用無菌0.006mol/L乙酸將膠原蛋白稀釋到0.012mg/mL,。加到相應(yīng)的培養(yǎng)器皿中,，確保膠原蛋白溶液鋪滿器皿的表面。開蓋在超凈臺上過夜晾干,，也可以在室溫放置1小時后,，用PBS洗3~4次后直接使用。包被好的器皿在4~25℃至少可保存三個月以上的時間,。2,、三維膠原凝膠的制備：A,、無細(xì)胞三維膠原凝膠的制備（以配制1mg/mL三維膠1mL為例）將200μL本品加到置于冰浴的離心管中,，加入690μL雙蒸水，然后加到12μL0.1mol/LNaOH中（如果反過來把12μL0.1mol/LNaOH加到膠原溶液中,，會由于NaOH不能迅速混勻而產(chǎn)生局部的膠原凝結(jié)）,，立即混勻。再加入100μL10×PBS或10×培養(yǎng)液,，混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中（混勻后pH為7左右,，如果PBS或培養(yǎng)液中沒有加酚紅，初次使用時需要測定pH值）,。將培養(yǎng)器皿在室溫放置20min待膠凝固后,，轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)箱內(nèi)。如果配制中使用的是10×PBS,，使用前需要加入適當(dāng)體積的細(xì)胞培養(yǎng)液預(yù)平衡,。成功建立了利用自制鼠尾膠原培養(yǎng)大鼠耳蝸邊緣細(xì)胞的方法，并且制作簡便,成本低廉,。珠海鼠尾膠原廠家
鼠尾膠原是一種天然培養(yǎng)基和一種天然的黏附劑,，可用于細(xì)胞培養(yǎng)皿的包被，特別適合普通細(xì)胞培養(yǎng)器皿不易貼壁細(xì)胞的培養(yǎng),；也可用于制備三維膠原凝膠,，使細(xì)胞在模擬的三維環(huán)境中生長。制備鼠尾膠原方法：1,、取大鼠尾巴洗凈,，75%酒精浸泡5分鐘；2,、手持尾巴,，用止血鉗夾住鼠尾的較高，折斷尾骨后拉出尾腱,；3,、將尾腱剪斷置于平皿中，生理鹽水浸泡,；4,、重復(fù)步驟2,、3，直至尾腱量夠用,；5,、吸去生理鹽水，將尾腱稱重（0.5-1克）,；6,、將尾腱置于平皿內(nèi)剪碎，轉(zhuǎn)移至三角燒瓶中,；7,、按每克尾腱50ml的比例，加入0.1%醋酸溶液,；8,、搖晃，使尾腱分散于醋酸溶液中,，4℃放置一星期,；9、離心,，4000轉(zhuǎn)/分,，10-15分鐘；10,、吸取上清,，分裝成小瓶，4℃保存,。天津鼠尾膠原生產(chǎn)廠家膠原蛋白（Collagen）是結(jié)締組織和內(nèi)臟部位外基質(zhì)的主要成分,。
一種基于鼠尾膠原蛋白：1.一種基于鼠尾膠原蛋白制備的可吸收止血材料，為鼠尾膠原蛋白,、聚乙烯醇,、殼聚糖、水制成的凍干止血材料,，各材料重量配比為鼠尾膠原蛋白聚乙烯醇?xì)ぞ厶菫?-10%0.2-5%0.2-2%,，余量為水。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于鼠尾膠原蛋白制備的可吸收止血材料,，其特征在于凍干止血材料中,，各材料重量配比為鼠尾膠原蛋白聚乙烯醇?xì)ぞ厶菫?%2%1%，余量的水,。3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的基于鼠尾膠原蛋白制備的可吸收止血材料,，其特征在于鼠尾膠原蛋白來源于各品系SFP級大鼠鼠尾。
生物醫(yī)用鼠尾膠原蛋白的提取方法,，采用酸法與酶法相結(jié)合的工藝,，保持恒低溫?zé)o菌的環(huán)境,，利用同樣濃度的鹽溶液進(jìn)行兩次鹽析與離心，簡化了提純步驟,。所用酸為低濃度酸溶液,，并采用檸檬酸替代醋酸進(jìn)行提純。從提取原料到樣品生成過程中,，進(jìn)行多次真空冷凍干燥,，并經(jīng)進(jìn)一步處理獲得含水率在3％以下的膠原蛋白微粉；較后由滅菌,、無菌包裝,，成品膠原蛋白粉末的純度在98％以上。本發(fā)明獲得的膠原蛋白降低了蛋白的免疫原性,，提高了產(chǎn)率和生物相容性,，降低了成本,，適用于生物醫(yī)用材料,，所得到的膠原蛋白能完整地保留其特有的三股螺旋結(jié)構(gòu)。鼠尾膠原醋酸溶解：稀釋一定數(shù)量的膠原溶液,。
鼠尾膠原膠凝程序：膠原蛋白I按以下步驟使其pH達(dá)到堿性時凝膠,。1）將無菌5cm左右的紗布海綿貼在150mm培養(yǎng)皿的蓋子上來制備氨蒸氣室。用氫氧化銨使紗布飽和,，把蓋子放在150mm的培養(yǎng)皿上,，暫放置一邊。2）將膠原蛋白I均勻涂布在要包被物的表面上,，厚度可以根據(jù)需要改變,，膠原蛋白I（50-100μL）足以涂覆22mm的蓋玻片。對于直徑100mm的培養(yǎng)皿,，每個加入約6mL;對于60mm培養(yǎng)皿添加約2.3mL,，對于35mm培養(yǎng)皿添加約1mL。3）將涂有膠原蛋白的蓋玻片或帶有蓋子的培養(yǎng)皿轉(zhuǎn)移到氨蒸氣室并暴露三分鐘,。4）在無菌蒸餾水中（35mm培養(yǎng)皿加5mL,，60mm培養(yǎng)皿加10mL等）浸泡涂布的蓋玻片或培養(yǎng)皿30min。吸取原蒸餾水并加0.5-1.0mL無菌蒸餾水,，放置在層流罩中過夜,。5）吸出蒸餾水，用含血清的平衡鹽緩沖液溶液代替并保存在2-8°C,。鼠尾膠原蛋白還能用于制備三維膠,。開封鼠尾膠原直銷廠家
鼠尾膠原蛋白 型在濃度1mg/ml 以上， pH 左右時可形成具有一定強度三維膠,。珠海鼠尾膠原廠家
膠原蛋白的提取方法：1.堿法提?。簤A法提取膠原蛋白常用的處理劑為石灰,、氫氧化鈉、碳酸鈉等,。如Holzer等[5]采用1%～1.5%石灰水浸泡的方法提取膠原蛋白,。由于它容易造成肽鍵水解，因此得到的水解產(chǎn)物分子量比較低,。所以,，若想保留膠原的三股螺旋結(jié)構(gòu)，此法不可取,。2.鹽法提?。蝴}法提取膠原蛋白所用的中性鹽有鹽酸-三羥甲基胺基甲烷(Tris-HCl)、氯化鈉,、檸檬酸鹽等,。在中性條件下，當(dāng)鹽的濃度達(dá)到一定量時,，膠原溶解,。并且可采用不同濃度的氯化鈉對提取的膠原蛋白進(jìn)行鹽析處理，可以沉淀出不同類型的膠原蛋白,。珠海鼠尾膠原廠家