用伊紅乙醇液對(duì)比染色1~3min。（4）將切片放入95%乙醇中洗去多余的紅色,，然后放入無(wú)水乙醇中3~5min,，吸干后將切片放入二甲苯Ⅰ、Ⅱ中各3~5min,。3,、觀察在鏡下可見(jiàn)卵巢呈扁橢圓形，表面為單層扁平上皮細(xì)胞或單層立方上皮,，卵巢實(shí)質(zhì)分為皮質(zhì)和髓質(zhì),。可見(jiàn)上皮,，原始卵泡和生長(zhǎng)卵泡,。卵巢組織中各發(fā)育階段卵泡及卵巢基質(zhì)的形態(tài)結(jié)構(gòu)清晰可見(jiàn),細(xì)胞核呈藍(lán)紫色,細(xì)胞質(zhì)及間質(zhì)成分呈淺紅色,卵泡中卵母細(xì)胞、卵泡細(xì)胞,、透明帶均清晰可見(jiàn),。注意事項(xiàng)1.取材注意事項(xiàng)（1）取材動(dòng)作要迅速，不宜作太久的拖延以免組織細(xì)胞的成分,、結(jié)構(gòu)等發(fā)生變化,。（2）切片材料應(yīng)根據(jù)需要觀察的部位進(jìn)行選擇，盡可能不要損傷所需要的部分,。（3）切取的組織塊不宜太大,，以利于固定劑穿透，通常以5mmx5mmx2mm或10mmx10mmx2mm為宜,。2.固定注意事項(xiàng)（1）一般固定液,，都以新配為好，配好后應(yīng)貯存在陰涼處，不宜放在日光下,，以免引起化學(xué)變化,，失去固定作用。（2）有些混合固定液的成份之間會(huì)發(fā)生氧化還原作用,，一定要在使用前才混合,，如果混合太早，固定時(shí)就沒(méi)有作用了,。（3）固定材料時(shí),，固定液必須充足，一般為材料塊的20~30倍,，有些水分多的材料,，中間應(yīng)更換1~2次新液。（4）材料固定完畢后,。實(shí)驗(yàn)干貨 | 分子克隆實(shí)驗(yàn)——無(wú)縫克隆,。天津模式科研技術(shù)服務(wù)實(shí)驗(yàn)

保存于嚴(yán)密緊塞或加蓋的容器里，同時(shí)在容器外上標(biāo)簽,，并隨同材料在溶液中投入相應(yīng)的標(biāo)簽,，以免相互混淆。標(biāo)簽上注明固定液,、材料來(lái)源,、日期等。標(biāo)簽上的文字,，應(yīng)用黑色鉛筆或繪圖黑墨水書寫,。3.脫水注意事項(xiàng)（1）脫水原理：乙醇與石蠟不相溶，而二甲苯既能溶于乙醇又能溶于石蠟,。當(dāng)組織中全部被二甲苯占有時(shí),，光線可以透過(guò)，組織呈現(xiàn)出不同程度的透明狀態(tài),。（2）脫水必須在有蓋的玻璃品中進(jìn)行，防止吸收空氣中的水分,。（3）在更換高一級(jí)的脫水劑時(shí),，不要移動(dòng)材料以免損壞，可用吸管吸出器皿中的脫水劑,，再用吸水吸盡器皿內(nèi)剩余液,，然后于皿中加入高一級(jí)脫水劑。（4）在低濃度酒精中,，每級(jí)停留不宜太長(zhǎng),，否則易使組織變軟，助長(zhǎng)材料的解體。（5）在高濃度或純酒精中,，每級(jí)停留的時(shí)間也不宜太長(zhǎng),，否則會(huì)使組織變脆，影響切片,。（6）如需過(guò)夜,，應(yīng)停留在70%酒精中。（7）脫水必須徹底,，否則不易透明,，甚至使透明劑內(nèi)出現(xiàn)白色混濁現(xiàn)象。4.透明注意事項(xiàng)（1）使用透明劑時(shí),，要隨時(shí)蓋緊蓋子,，以免空氣中的水分進(jìn)入。（2）更換每級(jí)透明劑,，動(dòng)作要迅速,，一方面為了不使材料塊干涸，另一方面能避免吸收濕氣,。（3）在透明過(guò)程中,，如果材料周圍出現(xiàn)白色霧狀，說(shuō)明材料中的水未被脫凈,。廣西模式科研技術(shù)服務(wù)構(gòu)建ELISA試劑盒在國(guó)內(nèi)有許多種叫法,，例如：ELISA檢測(cè)試劑盒、ELISAKit,。

RNA甲基化修飾（m6A）研究RNA甲基化修飾約占所有RNA修飾的60%以上,，而N6-甲基腺嘌呤（N6-methyladenosine,m6A）是高等生物mRNA和lncRNAs上為普遍的修飾。目前發(fā)現(xiàn)microRNA,，circRNA,rRNA,tRNA和snoRNA上都有發(fā)生m6A修飾,。m6A修飾主要發(fā)生在RRACH序列中的腺嘌呤上，其功能由“編碼器(Writer)”,、“消碼器(Eraser)”和“讀碼器(Reader)”決定[1],。“編碼器(Writer)”即甲基轉(zhuǎn)移酶,，目前已知這個(gè)復(fù)合物的成分有METTL3,，METTL14,WTAP和KIAA1429；而ALKBH5和FTO作為去甲基酶（消碼器）可逆轉(zhuǎn)甲基化,；m6A由m6A結(jié)合蛋白識(shí)別,，目前發(fā)現(xiàn)m6A結(jié)合蛋白（讀碼器）有YTH結(jié)構(gòu)域蛋白（包括YTHDF1,YTHDF2,YTHDF3，YTHDC1和YTHDC2）和核不均一蛋白HNRNP家族（HNRNPA2B1和HNRNPC）,。m6A酶系統(tǒng)METTL3是早先被鑒定為結(jié)合SAM的組件,，其缺失引起小鼠胚胎干細(xì)胞,、Hela細(xì)胞和HepG2細(xì)胞中m6Apeaks的減少。METTL3及其同源蛋白METTL14定位在富含剪切因子的細(xì)胞核內(nèi)亞細(xì)胞器－核小斑（Nuclearspeckle）上,，顯示ｍ６Ａ修飾可能和ＲＮＡ的剪切加工相關(guān),。WTAP與METTL3–METTL14二聚體相互作用，并共定位于核小斑,，影響甲基化效率,，參與mRNA剪。而KIAA1429作為候選的甲基轉(zhuǎn)移酶復(fù)合體的新亞基,。

應(yīng)根據(jù)所檢測(cè)指標(biāo)的要求,，需采取不同策略處理。在如今分子學(xué)當(dāng)?shù)赖默F(xiàn)實(shí)背景下,，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)除了對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的體征及生理指標(biāo)進(jìn)行全的監(jiān)控外,，各種分子檢測(cè)甚至是組學(xué)檢測(cè)也開(kāi)始大行其道，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)束之后的機(jī)制研究成為了實(shí)驗(yàn)的重頭戲,。一般來(lái)說(shuō),，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)檢測(cè)對(duì)象主要包括：（1）體液中各類因子定性及定量檢測(cè)由于此類檢測(cè)對(duì)象多為蛋白及各類小分子物質(zhì)，因此在取樣過(guò)程中應(yīng)注意防止此類物質(zhì)降解,，在獲取后,，應(yīng)及時(shí)置于溫（≤-80℃）進(jìn)行保存，在后續(xù)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中,，也應(yīng)當(dāng)注意保存條件的穩(wěn)定性,，避免反復(fù)凍融。常用的方法便是酶聯(lián)免吸附測(cè)定（ELISA）,，除此之外,，可利用生化分析儀及不同檢測(cè)方法的（比色法、比濁法等）方法對(duì)各類生化指標(biāo)及因子進(jìn)行定性及定量檢測(cè),。（2）生理變化及免組化檢測(cè)常用的理檢測(cè)多使用H&E染色對(duì)細(xì)胞質(zhì)及細(xì)胞核進(jìn)行染色標(biāo)記,，以觀察細(xì)胞變化。除此之外,，許多特殊染色也在理生理變化中得到了應(yīng)用,，如利用Masson染色檢測(cè)纖維化變，Nissl染色檢測(cè)神經(jīng)元損傷,，β-半乳糖甘酶染色檢測(cè)細(xì)胞衰老等,。此外，還可以通過(guò)免組化技術(shù)對(duì)某些特異性標(biāo)記物進(jìn)行免顯色檢測(cè),，達(dá)到原位定性或定量檢測(cè)的目的,。,。干貨分享 | 避坑,，微生物培養(yǎng)的污染因素及預(yù)防方法,，少走彎路。

建立疾病模型的目的是為了防治人類疾病,。因此,，疾病模型研究結(jié)果的可靠程度取決于模型與人類疾病的相似或可比擬的程度。接下來(lái)就讓上海研錄帶您了解相關(guān)知識(shí),。一個(gè)好的疾病模型應(yīng)具有以下特點(diǎn)：①能夠再現(xiàn)所要研究的人類疾病,，動(dòng)物疾病表現(xiàn)應(yīng)該與人類疾病相似；②動(dòng)物能重復(fù)產(chǎn)生該疾病,，盡可能能在兩種動(dòng)物體內(nèi)復(fù)制該?。虎蹌?dòng)物背景資料完整,，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物合格,，生命周期要滿足實(shí)驗(yàn)需要;④動(dòng)物要價(jià)廉、來(lái)源充足,、便于運(yùn)送,；⑤盡可能選用小動(dòng)物。生物醫(yī)學(xué)科研專業(yè)設(shè)計(jì)中常要考慮如何建立動(dòng)物模型的問(wèn)題,，因?yàn)楹芏嚓U明疾病及療效機(jī)制的實(shí)驗(yàn)不可能或不應(yīng)該在患者身上進(jìn)行,。常要依賴于復(fù)制動(dòng)物模型，但一定要進(jìn)行周密設(shè)計(jì),，設(shè)計(jì)時(shí)要遵循下列一些原則：(一)相似性在動(dòng)物身上復(fù)制人類疾病模型,，目的在于從中找出可以推演應(yīng)用于患者的有關(guān)規(guī)律。外推法(extrapolation)要冒風(fēng)險(xiǎn),，因?yàn)閯?dòng)物與人到底不是一種生物,。如，在動(dòng)物身上無(wú)效的藥物不等于臨床無(wú)效,，反之亦然,。因此，設(shè)計(jì)動(dòng)物疾病模型的一個(gè)重要原則是,，所復(fù)制的模型應(yīng)盡可能近似于人類疾病的情況,。能夠找到與人類疾病相同的動(dòng)物自發(fā)性疾病當(dāng)然是比較好的。(二)重復(fù)性理想的動(dòng)物模型應(yīng)該是可重復(fù)的,，甚至是可以標(biāo)準(zhǔn)化的,。如。建立疾病模型的目的是為了防治人類疾病,。寧夏疾病科研技術(shù)服務(wù)培養(yǎng)

腫瘤細(xì)胞具有極強(qiáng)的增殖能力,，在一個(gè)適宜,裸鼠成瘤是常見(jiàn)的驗(yàn)證腫瘤細(xì)胞體內(nèi)增殖模型。天津模式科研技術(shù)服務(wù)實(shí)驗(yàn)

3）基因/蛋白質(zhì)表達(dá)定性或定量檢測(cè)在進(jìn)行分子檢測(cè)的過(guò)程中,，保持核酸和蛋白質(zhì)的完整性至關(guān)重要,，因此在取樣過(guò)程中,，應(yīng)盡量避免核酸及蛋白質(zhì)的降解。如不注意采樣過(guò)程,，將會(huì)導(dǎo)致樣本中的核酸及蛋白質(zhì)的無(wú)差別降解,，嚴(yán)重影響后續(xù)分子檢測(cè)結(jié)果。在條件允許的情況下,，樣本在離體后應(yīng)立刻裝入凍存管內(nèi),，并立即放入液氮中進(jìn)行冷凍。在RNA提取樣本的保存過(guò)程中,，可以選擇非冷凍型RNA保存液或Trizol試劑進(jìn)行RNA酶的,。針對(duì)蛋白質(zhì)提取樣本的保存，我們同樣可以使用商品化的蛋白酶劑進(jìn)行短期處理,。聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PolymeraseChnReaction,，PCR）及免印跡（Westernblotting，WB）,，這兩種實(shí)驗(yàn)手段是分子學(xué)檢測(cè)中不可或缺的一部分,，也是發(fā)表至關(guān)重要的分子檢測(cè)數(shù)據(jù)。PCR主要用來(lái)對(duì)基因在基因組層面或轉(zhuǎn)錄層面的變化進(jìn)行定性或定量檢測(cè),，而WB則主要用來(lái)對(duì)某一蛋白質(zhì)的表達(dá)進(jìn)行定量檢測(cè),。（4）轉(zhuǎn)錄組學(xué)、蛋白質(zhì)組學(xué)及代謝組學(xué)檢測(cè)隨著檢測(cè)水平及相關(guān)產(chǎn)業(yè)的不斷發(fā)展,，各類組學(xué)檢測(cè)的價(jià)格降低,，實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)中也常常運(yùn)用組學(xué)檢測(cè)來(lái)提升實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的檔次。在我們進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組學(xué)及蛋白質(zhì)組學(xué)的檢測(cè)過(guò)程中,，同樣是要首先確保目標(biāo)RNA或蛋白質(zhì)的片段完整性,。天津模式科研技術(shù)服務(wù)實(shí)驗(yàn)