外泌體(exosome),,特指直徑在40-100nm的盤狀囊泡。其主要來源于細胞內(nèi)內(nèi)溶酶體微粒內(nèi)陷形成的多囊泡體,,經(jīng)多囊泡體外膜與細胞膜融合后釋放到胞外基質(zhì)中?,F(xiàn)已證實可以分泌外泌體的細胞有:肥大細胞、淋巴細胞,、樹突狀細胞,、瘤細胞,、間充質(zhì)干細胞等,。外泌體在免疫中抗原呈遞、瘤的生長與遷移,、組織損傷的修復(fù)等生理病理上起著重要的作用,。同時,不同細胞分泌的外泌體具有不用的組成成分和功能,,可作為疾病診斷的生物標(biāo)志物,。細胞外囊泡是蛋白質(zhì)、mRNA,、miRNA和脂質(zhì)運輸來完成細胞間通訊通路的重要媒介,,根據(jù)它們的大小和發(fā)生分為三類,,包括外泌體、微泡和凋亡小體,。其中,,外泌體是直徑大約為40-100nm的包裝囊泡,由多種細胞分泌,,內(nèi)含有特定的蛋白質(zhì),、脂質(zhì)、細胞因子或遺傳物質(zhì),。來源于不同的組織的外泌體不光具有其特異性蛋白分子,,而且還包含其行使功能的關(guān)鍵分子形成了一種全新的細胞間信息傳遞系統(tǒng),影響細胞的生理狀態(tài)并與多種疾病的發(fā)生與進程密切相關(guān),。寧波正規(guī)外泌體提取試劑平均價格
外泌體在肺病進程中的作用:肺病細胞來源外泌體(LCC-exosome)可以通過刺激一些病癥血管的形成來促進一些病癥的生長,。據(jù)相關(guān)報道稱,LCC-exosome中的miR-210可以通過調(diào)節(jié)基質(zhì)細胞中酪氨酸受體激酶A3的含量,,促進一些病癥血管的生成,;而LCC-exosome中的miR-23a則可以通過啟動脯氨酰羥化酶及壓制緊密結(jié)合蛋白ZO-1來促進肺病的生血管作用。此外,,有研究發(fā)現(xiàn),,外泌體中的內(nèi)容物可以觸發(fā)上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)。晚期肺病患者血清中外泌體波形蛋白表達增加,,促使人正常支氣管上皮細胞出現(xiàn)EMT,,從而使肺支氣管正常上皮細胞出現(xiàn)增殖,遷移能力,。色譜法,。這種方法分離到的外泌體在電鏡下大小均一,但是需要特殊的設(shè)備,,應(yīng)用不普遍長沙正規(guī)外泌體提取試劑廠家直銷外泌體提?。焊咚匐x心以消除更大的囊泡。
外泌體的提取,、分離方法:尺寸排阻色譜法和超濾法,;尺寸排阻色譜法是利用分子篩理論,較初是根據(jù)蛋白質(zhì)分子大小分離蛋白質(zhì)的色譜技術(shù),。該方法的主要優(yōu)點是不需要很大的離心力,,從而保證了外泌體的完整性。Mol等[13]對比超高速離心和尺寸排阻色譜法得到的外泌體蛋白,,結(jié)果顯示,,后者得到的外泌體的蛋白豐度高于前者。這些基于過濾或尺寸排阻色譜的新方法為外泌體大規(guī)模的生產(chǎn)和臨床應(yīng)用提供了可能,。超濾也是根據(jù)外泌體的尺寸將其分離出來的一種方法,,超濾一般被認為是外泌體分離過程中的一個準(zhǔn)備過程,,通過超濾除去大分子和小分子的蛋白質(zhì)。不過連續(xù)的超濾可以分離出外泌體,,和超高速離心相比,,超濾不需要特殊的設(shè)備就可以較短時間內(nèi)分離出外泌體。但是,,超濾膜對外泌體的黏附作用會降低外泌體的產(chǎn)量,,并且超濾過程中施加的外力可能會使外泌體變形或者破裂。
外泌體(Exosome)是由細胞分泌而來的微小囊泡,,直徑約為30-200nm,,密度在1.13-1.21g/ml,具有杯狀形態(tài),、雙層膜結(jié)構(gòu),,天然存在于血液、尿液,、唾液,、母乳和細胞培養(yǎng)基等生物體液中。包括瘤細胞在內(nèi)幾乎所有類型的細胞(免疫細胞,、神經(jīng)細胞,、干細胞),都可以產(chǎn)生并釋放exosome,。Exosome內(nèi)含有與細胞來源相關(guān)的蛋白質(zhì)rRNA和microRNA,,Exosome可通過細胞膜受體直接受體細胞,也可運輸?shù)鞍踪|(zhì),、mRNA,、miRNA、lncRNA,、circRNA,,甚至細胞器進入受體細胞,參與細胞間通訊,。Exosome在免疫應(yīng)答,、炎癥反應(yīng)、血管生成,、凋亡,、凝血和廢物處理等生理過程發(fā)揮關(guān)鍵作用,不同細胞來源的exosome所含有的RNA和蛋白成分不盡相同,,可作為多種疾病的早期診斷標(biāo)記物,也能作為靶向藥物的載體進行疾病,。miRNA是一類22nt左右大小的非編碼分子,,它可以通過外泌體從一個地方轉(zhuǎn)運到另外一個地方行使基因沉默功能,。通過檢測外泌體中miRNA表達變化,可以發(fā)現(xiàn)外泌體中miRNA特異性功能獲得的外泌體純度較高,,但步驟繁瑣,,耗時。
外泌體可通過流式,、WB(檢測指標(biāo)有CD9,CD63,CD81),、電鏡觀察、NTA粒徑追蹤等手段檢測,,普遍應(yīng)用于藥物載體,、疾病診斷marker、精細醫(yī)療,、一些病癥治病等方面研究,。由于外泌體直徑小,樣本含量低,,提取十分困難,。已有的外泌體分離方式有密度梯度離心、超濾離心法,、免疫磁珠抗體捕獲,、商用試劑盒等。但到目前為止,,仍沒有一種提取方法能同時保證外泌體的含量,、純度以及生物活性。外泌體是細胞間進行物質(zhì)運輸和信息交流的重要工具,,可以通過調(diào)節(jié)免疫功能促進一些病癥的增殖,,血管新生和一些病癥轉(zhuǎn)移。與細菌傳染,,幫助細菌逃避免疫關(guān)系很大,,并與心血管疾病,老年癡呆等疾病具有密切關(guān)系近幾年來,,市場上已出現(xiàn)各種商業(yè)化的外泌體提取試劑盒,。寧波正規(guī)外泌體提取試劑哪里買
外泌體提取色譜法是利用根據(jù)凝膠孔隙的孔徑大小與樣品分子尺寸的相對關(guān)系而對溶質(zhì)進行分離的分析的方法。寧波正規(guī)外泌體提取試劑平均價格
研究中研究人員發(fā)現(xiàn),,胃病細胞周圍富含TAM,。TAM以M2極化表型為特征,并促進胃病細胞在體外和體內(nèi)的遷移,。此外,,研究人員發(fā)現(xiàn)M2衍生的外泌體決定了TAMs介導(dǎo)的遷移活動。通過使用質(zhì)譜方法,,研究人員確定載脂蛋白E(ApoE)是M2巨噬細胞衍生的外泌體中高度特異性和有效的蛋白質(zhì),。ApoE是一種M2特異性且高度豐富的來源于M2外泌體的蛋白質(zhì),,是決定胃病細胞遷移潛力的主要驅(qū)動因素。然而,,來自ApoE-/-的小鼠M2巨噬細胞的外泌體在體外和體內(nèi)對胃病細胞的遷移沒有顯著影響,。在機制上,M2巨噬細胞衍生的外泌體介導(dǎo)ApoE啟動的PI3K-Akt信號通路,,并在TAM和受體胃病細胞之間進行細胞間轉(zhuǎn)移,,促進細胞骨架的遷移??偟膩碚f,,該研究發(fā)現(xiàn)外泌體介導(dǎo)的功能性ApoE蛋白從TAM轉(zhuǎn)移到一些病癥細胞,促進了胃病細胞的遷移,。寧波正規(guī)外泌體提取試劑平均價格