目前為止已鑒別了2500余種miRNAs分子。例如,，血液外泌體miR-21的升高已被證實(shí)與胰腺ai,、結(jié)直腸ai、肝ai,、乳腺ai,、卵巢ai及食管ai等多種中流相關(guān)，可能與其參與中流xue管生成有關(guān),，研究表明肺ai細(xì)胞釋放的外泌體miR-21會通過STAT3依賴機(jī)制誘導(dǎo)周圍支氣管細(xì)胞血管內(nèi)皮生長因子（vascularendothelialgrowthfactor,，VEGF）的產(chǎn)生，從而促進(jìn)血管生成,。在食管ai中,，miR-21還可以反映中流的惡性程度，食管ai患者的miR-21水平與良性中流患者相比急劇上升,，上升的miR-21水平也與中流的淋巴侵襲和轉(zhuǎn)移相關(guān),。在膀胱ai患者中，尿液中的miR-21和miR-4454會明顯上調(diào),。所有培養(yǎng)的細(xì)胞類型均可分泌外泌體,。外泌體提取 方法
外泌體普遍參與細(xì)胞間物質(zhì)運(yùn)輸與信息傳遞,，調(diào)控細(xì)胞生理活動。同時,，外泌體具有抗原提呈,、免疫逃逸、誘導(dǎo)正常細(xì)胞轉(zhuǎn)化,、促進(jìn)種瘤發(fā)生和轉(zhuǎn)移等作用,；此外，外泌體還可以作為“天然的納米粒子”來進(jìn)行藥物遞送,。外泌體相關(guān)數(shù)據(jù)庫有哪些？lexoRBase數(shù)據(jù)庫收集和描述人類血液外泌體中所有長的RNA,，包括circRNA,、lncRNA和mRNA。lEVpedia和Vesiclepedia數(shù)據(jù)庫匯總了不同囊泡研究中發(fā)現(xiàn)的蛋白,、mRNA,、miRNA、脂類等信息,。lExoCarta數(shù)據(jù)庫主要收錄了包括人,、大鼠、小鼠,、綿羊等幾個物種的286個研究結(jié)果,，涉及蛋白、mRNA,、miRNA,、脂類等信息。外泌體是各種細(xì)胞外泌的直徑在30-100nm之間的膜囊泡,。外泌體提取 方法外泌體在化療藥物的促轉(zhuǎn)移過程中具有重要的作用,。
在免疫系統(tǒng)中，淋巴細(xì)胞,、樹突狀細(xì)胞,、巨噬細(xì)胞、肥大細(xì)胞等均可以產(chǎn)生外泌體,。研究表明免疫細(xì)胞來源的外泌體能夠明顯影響機(jī)體的免疫調(diào)節(jié)機(jī)制,，包括調(diào)節(jié)抗原呈遞、免疫激huo,、免疫監(jiān)督等,。不同免疫細(xì)胞來源的外泌體功能不同，以樹突狀細(xì)胞(該細(xì)胞具有免疫刺激能力,，是目前能夠激huo初始T細(xì)胞的抗原遞呈細(xì)胞)來源的外泌體為例,，其外泌體的免疫刺激作用取決于來源細(xì)胞的成熟狀態(tài),。成熟的樹突狀細(xì)胞外泌體內(nèi)包含能夠直接激huoT細(xì)胞的MHCclassⅠ和MHCclassⅡ，共刺激分子如CD40,、CD8,、CD86和熱激蛋白，這些分子使樹突狀細(xì)胞來源的外泌體具有抗原呈遞,、調(diào)節(jié)免疫響應(yīng)的生物功能,。
利用蛋白質(zhì)免疫印跡和酶聯(lián)免疫吸附分析技術(shù)可以對外泌體標(biāo)志性蛋白質(zhì)進(jìn)行定性定量分析。其中蛋白免疫印跡是外泌體的經(jīng)典表征手段之一,，操作時往往需要細(xì)胞裂解液作為陰性對照,。常用的外泌體標(biāo)志性蛋白質(zhì)包括四跨膜蛋白質(zhì)CD63、CD81,、CD9,、中流易感基因101蛋白(TSG101)、水通道蛋白2(AQP2,，尿液中)和凋亡誘導(dǎo)因子6相互作用蛋白(Alix)等,，內(nèi)參蛋白質(zhì)可以是肌動蛋白(βActin)或甘油醛－3-磷酸脫氫酶，陰性對照蛋白可以是阻抑素(PHB,，線粒體標(biāo)志蛋白)或鈣聯(lián)結(jié)蛋白Calnexin,。在酶聯(lián)免疫吸附析法中，外泌體裂解液通過固載有抗體的固相基質(zhì),，隨后與檢測抗體共孵育,。兩種方法均存在操作繁瑣、耗時長的問題,，相比較而言,，酶聯(lián)免疫吸附分析法比蛋白質(zhì)免疫印跡法更加快速，適用于高通量分析,。神經(jīng)細(xì)胞來源的外泌體含有與神經(jīng)退行性疾病相關(guān)的分子,。
獲得囊泡粒徑分布的兩種方法動態(tài)光散射(DLS)和納米顆粒跟蹤分析(NTA)都被廣fan應(yīng)用于外泌體顆粒數(shù)目和粒徑分布的測量，但兩種方法也各有不足,。動態(tài)光散射法中散射光強(qiáng)度依賴于顆粒質(zhì)量(體積),，混合體系中大囊泡的存在(即使只有很少的量)將嚴(yán)重影響測量結(jié)果，因此動態(tài)光散射法更適用于單分散體系,。而且動態(tài)光散射法所得的結(jié)果強(qiáng)烈依賴于所應(yīng)用的數(shù)學(xué)算法,。而采用納米顆粒跟蹤分析儀對不同粒徑范圍的囊泡進(jìn)行檢測時，為了得到準(zhǔn)確的濃度和粒徑信息,，需要根據(jù)所要測量的顆粒粒徑范圍對儀器分別校準(zhǔn),，操作繁瑣。受檢測靈敏度所限，納米顆粒跟蹤分析儀適用于粒徑范圍50nm～1μm的顆粒,，粒徑小于50nm的外泌體無法檢測,。除此之外，兩種方法都依賴光散射和粒子的布朗運(yùn)動進(jìn)行分析,，難以區(qū)分合成的納米材料,、大蛋白質(zhì)聚合體和生物囊泡。外泌體由于包含的內(nèi)容物具有明顯的組織特異性,，為其能成為瘤早期診斷的生物標(biāo)志物提供了重要保障,。外泌體主要成分是什么
建立記錄各論文實(shí)驗(yàn)條件的數(shù)據(jù)庫也可作為規(guī)避混亂的方法之一。外泌體提取 方法
人體內(nèi)多種細(xì)胞及體液均可分泌外泌體,，包括內(nèi)皮細(xì)胞,、免疫細(xì)胞、血小板,、平滑肌細(xì)胞等,。當(dāng)其由宿主細(xì)胞被分泌到受體細(xì)胞中時，外泌體可通過其攜帶的蛋白質(zhì),、核酸、脂類等來調(diào)節(jié)受體細(xì)胞的生物學(xué)活性,。外泌體介導(dǎo)的細(xì)胞間通訊主要通過以下三種方式：一是外泌體膜蛋白可以與靶細(xì)胞膜蛋白結(jié)合,，進(jìn)而喚醒靶細(xì)胞細(xì)胞內(nèi)的信號通路。二是在細(xì)胞外基質(zhì)中,，外泌體膜蛋白可以被蛋白酶剪切,，剪切的碎片可以作為配體與細(xì)胞膜上的受體結(jié)合，從而喚醒細(xì)胞內(nèi)的信號通路,。有報(bào)道稱一些外泌體膜上蛋白在其來源細(xì)胞膜上未能檢測出,。三是外泌體膜可以與靶細(xì)胞膜直接融合，非選擇性的釋放其所含的蛋白質(zhì),、mRNA以及microRNA,。外泌體提取 方法